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探針法PCR檢測(cè)試劑盒的測(cè)試原理

更新時(shí)間:2022-10-25      點(diǎn)擊次數(shù):280
  探針法PCR檢測(cè)試劑盒的原理在于PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;剛開始時(shí),探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。
  探針法PCR檢測(cè)試劑盒檢測(cè)方法的局限性:
  1.樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);
  2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果;
  3.陽性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果;
  4.病原體在流行過程中基因突變、重組,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
  5.試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果;
  6.本檢測(cè)結(jié)果僅供參考,如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。
  探針法PCR檢測(cè)試劑盒常用于熒光免疫法中標(biāo)記抗原或抗體,亦可用于微環(huán)境,如表面活性劑膠束、雙分子膜、蛋白質(zhì)活性位點(diǎn)等處微觀特性的探測(cè)。通常要求探針的摩爾吸光系數(shù)大,熒光量子產(chǎn)率高;熒光發(fā)射波長(zhǎng)處于長(zhǎng)波且有較大的斯托克斯位移;用于免疫分析時(shí),與抗原或抗體的結(jié)合不應(yīng)影響它們的活性。

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