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豚鼠ELISA試劑盒正確的操作步驟及注意事項

更新時間:2022-11-24      點擊次數(shù):268
  豚鼠ELISA試劑盒具有準確性高、檢測時間短、價格低廉、判斷結果有客觀標準、結果便于記錄和保存等優(yōu)點,適合于大批標本的檢測,廣泛應用于食品安全檢測、醫(yī)療檢測以及免疫實驗分析等領域。對免疫測定技術發(fā)展的影響也是直接而又有效的,它使我們對以前一些難以檢測的生物活性物質變得輕而易舉,并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。既不影響抗原抗體反應的特異性,也不改變酶本身的活性。
  豚鼠elisa試劑盒的操作步驟
  1.標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,第二孔中分別加標準品100μl,然后第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為30ng/L,20ng/L,10ng/L,5ng/L,2.5ng/L)。
  2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
  3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
  4.配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
  5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
  6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
  7.溫育:操作同3。
  8.洗滌:操作同5。
  9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
  11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
  豚鼠elisa試劑盒注意事項
  1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
  2、濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
  3、各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間建議控制在5分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
  4、請每次測定的同時做標準曲線,建議做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)。
  5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  6、底物請避光保存。
  7、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

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